一.   實(shí)驗(yàn)原理：試劑盒采用雙抗一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被抗原的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗原，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的甲型肝炎病毒IgM抗體（HAV-IgM）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。

二.  人抗甲型肝炎病毒IgM(HAV-IgM)ELISA試劑盒組成及其配置：

三.   常見問題解答：

1.     【高背景或陰性對照值偏高】

可能的原因：陰性對照孔被陽性對照或樣品污染；抗體非特異性結(jié)合；酶結(jié)合物過濃；孵育溫度過高；底物在使用前曝光；讀板前停留時間過長

上海軒澤康生物為您提供解決方案：洗滌時勿將洗液溢出孔外；建議更換封閉液；檢查酶結(jié)合物是否按照說明書規(guī)定稀釋；檢查孵育箱的溫度是否正確、穩(wěn)定；應(yīng)保存在暗處、避光；加終止液后3分鐘內(nèi)讀數(shù)。

2.     【陽性對照值偏低或低吸光度】

可能的原因: 試劑未平衡至室溫;檢測體積偏小;孵育時間過短;底物受污染;樣本中有抑制劑。

上海軒澤康生物為您提供解決方案：實(shí)驗(yàn)開始前，將試劑盒從冰箱內(nèi)取出平衡至室溫（20-25℃）；檢查移液器吸液通道是否堵塞；使用計(jì)時器，準(zhǔn)確孵育時間；使用新配置的試劑，重新實(shí)驗(yàn)；疊氮鈉會抑制HRP酶的活性。

四. 人抗甲型肝炎病毒IgM(HAV-IgM)ELISA試劑盒操作注意事項(xiàng)：

1.  試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶溶解后再使用。

2.  實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

3.  預(yù)處理后的樣本無需稀釋，直接取50μL加樣即可。

4.  嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。

5.  所有液體組分使用前充分搖勻。

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